DTT是一種小分子氧化還原試劑。
二硫蘇糖醇是一種常用還原劑,又叫二巰基蘇糖醇(簡(jiǎn)稱DTT),具有很強(qiáng)的還原性,其還原性很大程度上是由于其氧化狀態(tài)六元環(huán)(含二硫鍵)的構(gòu)象穩(wěn)定性。還原力受pH值的影響,只在pH值大于7的情況下能夠發(fā)揮還原作用。這是因?yàn)橹挥忻撊ベ|(zhì)子的硫醇鹽負(fù)離子(-S–)才具有反應(yīng)活性,硫醇(-SH)則沒(méi)有;而巰基的pKa一般為~8.3。 二硫蘇糖醇對(duì)一個(gè)典型的二硫鍵的還原是由兩步連續(xù)的巰基-二硫鍵交換反應(yīng)所組成:其中,第一步反應(yīng)所形成的中間態(tài)很不穩(wěn)定,因?yàn)镈TT上的第二個(gè)巰基趨向于與被氧化的硫原子連接,使中間態(tài)很快被轉(zhuǎn)化為DTT的環(huán)狀氧化結(jié)構(gòu),從而完成對(duì)二硫鍵的還原。
由于容易被空氣氧化,因此二硫蘇糖醇(DTT)的穩(wěn)定性較差;但冷凍保存或在惰性氣體中處理能夠延長(zhǎng)它的使用壽命。由于質(zhì)子化的硫的親核性較低,隨著pH值的降低,DTT的有效還原性也隨之降低;而Tris(2-carboxyethyl)phosphine HCl(TCEP鹽酸鹽)可以作為低pH值條件下DTT的替代品,而且也比DTT更為穩(wěn)定。
二硫蘇糖醇有抗氧化作用,它能保護(hù)酶分子上的還原性基團(tuán),維持還原性環(huán)境,穩(wěn)定酶的活性。DTT中還含有一定RNA酶抑制劑,具有抑制RNA酶活性的作用。具有巰基乙醇(二巰基乙醇)相似的作用,但DTT的刺激性氣味要小很多,毒性也比巰基乙醇低很多。而且DTT比巰基乙醇的濃度低7倍時(shí),兩者效果相近。但DTT價(jià)格略高一些。用作蛋白質(zhì)琉基保護(hù)劑和蛋白質(zhì)二硫鍵的裂解和順序分析。
目前實(shí)施的毒物及劇毒物法令將β-巰基乙醇和含有β-巰基乙醇的試劑指定為毒物,二硫蘇糖醇具有與β-巰基乙醇同樣作用,可保護(hù)蛋白質(zhì)SH基,切斷二硫鍵,因此將逐漸得到相關(guān)應(yīng)用領(lǐng)域的重視。
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